Seminario 30/11: Estudio del mecanismo de ensamblado de Arenavirus: disección molecular de la interacción entre la nucleoproteína y la proteína z del virus Junín

Título: Estudio del mecanismo de ensamblado de Arenavirus: disección molecular de la interacción entre la nucleoproteína y la proteína z del virus Junín

Disertante: Alicia Armella Sierra

Centro de Virología Animal (CEVAN), Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET)- Universidad Abierta Interamericana, Buenos Aires, Argentina.

Resumen:

El arenavirus Junín (JUNV) es el agente causal de la Fiebre Hemorrágica Argentina, una enfermedad endémica de la región central de nuestro país. Los arenavirus son virus envueltos, cuyo genoma está constituido por dos segmentos de ARN de cadena simple, llamados S y L. El segmento S codifica la nucleoproteína (NP) y el precursor de las glicoproteínas de envoltura (GPC). El segmento L codifica la ARN polimerasa (proteína L), y la proteína matriz Z, que es esencial para la morfogénesis viral. La proteína Z está organizada en un dominio RING central, flanqueado por los dominios móviles amino (N) y carboxi (C) terminales. Ambos segmentos genómicos se asocian estrechamente a moléculas de NP formando las nucleocápsides virales, que funcionan como templado de la polimerasa L para la transcripción y replicación del genoma viral. Nuestro laboratorio estudia los mecanismos de transcripción, replicación y morfogénesis de arenavirus, tomando como modelo al arenavirus no patógeno Tacaribe (TCRV), estrechamente relacionado a JUNV. Mediante la utilización de un sistema de genética reversa que dirige la producción de partículas de tipo viral (VLPs) quiméricas infectivas, se demostró que la interacción entre la proteína Z de JUNV y NP de TCRV es necesaria para la incorporación de las nucleocápsides virales a las VLPs quiméricas. No obstante, los residuos involucrados en la interacción no han sido completamente esclarecidos. Con el propósito de comprender el mecanismo de ensamblado de JUNV, en
este trabajo se propuso: 1) Caracterizar la interacción entre las proteínas NP y Z de JUNV in vitro y 2) Dilucidar los residuos de Z involucrados en la interacción. Para ello, se expresó,
purificó y caracterizó el dominio C-terminal de la proteína NP de JUNV y se obtuvo la proteína Z de JUNV como fusión a Maltose Binding Protein (MBP). La interacción entre ambas proteínas fue analizada mediante ensayos de retardo en geles de agarosa. Además, la interacción Z-NP fue evaluada en el contexto celular, mediante experimentos de inmunoprecipitación y microscopía confocal utilizando mutantes puntuales de Z. Los resultados, que sugieren que NP presenta actividad exonucleasa, no reportado previamente para JUNV, y que su dominio C-terminal interactúa directamente con Z, pueden contribuir a la identificación de nuevos blancos moleculares para el desarrollo de terapias específicas contra este grupo de virus.