Título: "Identificación, persistencia y diseminación de nuevos genes de resistencia a antibióticos procedentes de sitios de bajo impacto antropogénico"
Disertante: MSc. Adrián Gonzales Machuca
Laboratorio de Investigaciones de Mecanismos de Resistencia a Antibióticos - IMPaM - UBA - CONICET
Directora: Dra. Daniela Centrón
Co-directora: Dra. María Paula Quiroga
Resumen:
La resistencia a los antimicrobianos (RAM) representa una seria amenaza para la salud humana. La RAM tiene como origen al medioambiente, donde las bacterias han desarrollado mecanismos para inactivar sustancias antimicrobianas. Entre estos mecanismos destacan las β-lactamasas, las cuales se han transferido del medioambiente a cepas clínicas mediante transferencia horizontal genética (THG). Las vesículas extracelulares (VEs) han sido descriptas recientemente como un mecanismo THG de importancia ecológica, lo que subraya la importancia de su estudio como un mecanismo de propagación de RAM.
Para investigar el papel de las VEs en la diseminación de la RAM en el medioambiente, se realizaron distintas campañas de recolección de bacterias en sitios de bajo impacto antropogénico. Como resultado se aislaron las cepas Ewingella americana 9AL34 (Isla grande de Tierra del Fuego) y Enterobacter soli PE7AN1 (Amazonía peruana). Mediante PCR, se detectó el gen intI1, codificante de la integrasa de clase 1 en estos aislamientos. Posteriormente, el análisis bioinformático de sus genomas permitió identificar 3 genes codificantes de β-lactamasas no descritas anteriormente: blaFONA-like, de clase A y blaSFDC-like de clase C en E. americana 9AL34 y blaACT-like, de clase C en E. soli PE7AN1. Asimismo, se realizó la predicción de la estructura tridimensional de las proteínas codificadas por estas β-lactamasas. El alineamiento de estas estructuras con otras β-lactamasas cristalizadas con cefalosporinas de 3ra generación reveló distintos sitios de interacción con estos ligandos. Finalmente, se extrajeron y se caracterizaron las VEs de estos aislamientos mediante ultracentrifugación, análisis de seguimiento de nanopartículas y microscopía electrónica de transmisión. Parte de las VEs obtenidas fueron tratadas con DNAsa I y tritón X y se realizó la extracción de ADN empleando fenol-cloroformo. Tanto las VEs tratadas como no tratadas se usaron como molde de PCR, lo que permitió detectar los genes blaFONA-like, blaSFDC-like y blaACT-like en su interior y asociadas a sus membranas, evidenciando la capacidad de transporte de estos elementos.
Estos resultados destacan el potencial del medioambiente como reservorio de genes de resistencia y a las VEs como mecanismo de THG de la RAM.
