CATEGORIA: DETERMINACIONES Y CERTIFICACIONES
ST 4556
Determinación de Rango de Hospedador utilizando cepas de Staphylococcus aureus de origen animal y humano.
Metodología
Técnica por “spot” en agar blando: Se crece un cultivo de Staphylococcus aureus en 10 ml de caldo tripteína de soja (TSB) a 37°C y agitación (200 rpm) hasta alcanzar una densidad óptica a 600 nm (DO600) igual a 0.4. En un tubo se mezclan 0.1 ml del cultivo bacteriano junto con 5 ml de agar tripteína de soja (TSA) blando (0.75 % de agar) fundido y a la temperatura de 45°C. Se agrega 0.05 ml cloruro de calcio. Se agita evitando las burbujas y se vuelca sobre una placa de TSA (4-5 mm espesor). Luego de que solidifique, se coloca sobre la superficie blanda un spot de 10 µl de la suspensión del bacteriófago a evaluar. Los “spot” se realizan por duplicado para cada suspensión fágica. Las placas se incuban a 37°C durante 18-22 hs. Se registra como cepa sensible a la acción lítica del bacteriófago aquella que presente un halo claro (lisis positiva) en la zona del “spot”.
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