CATEGORÍA: DETERMINACIONES Y CERTIFICACIONES
ST 4555
Titulación de bacteriófagos utilizando cepas de Staphylococcus aureus de origen animal y humano.
Metodología
Técnica de doble capa de agar para la titulación de bacteriófagos infectivos: Se prepara un cultivo en caldo tripteína de soja (TSB) de la cepa de Staphylococcus aureus sensible a la acción del bacteriófago a cuantificar creciendo a 37°C y 200 rpm hasta DO600 = 0.4. Se preparan diluciones seriadas en base 10 de la suspensión fágica en TSB. En un tubo se mezclan 0.1 ml de cada dilución de la suspensión fágica y 0.1 ml de la suspensión bacteriana junto con 0.02 ml de cloruro de calcio. Al cabo de 10 minutos, se agregan 5 ml de agar tripteína de soja (TSA) blando fundido (45°C) con 0.05 ml de cloruro de calcio. Se homogeniza y vierte cada mezcla sobre una placa de TSA. Las placas se incuban a 37°C durante 18-22 hs. Se cuentan el número de unidades formadoras de placas de lisis (UFP) y se calcula la cantidad de bacteriófagos infectantes como las UFP/ml. La cuantificación se realiza por duplicado.
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