CATEGORÍA: SERVICIOS DE DIAGNÓSTICO
ST 1040
Diagnóstico rápido de las infecciones/colonizaciones de los pacientes con Fibrosis Quística directamente de la muestra de esputo: Identificación de certeza de las especies del Complejo Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus meticilino resistente directamente de la muestra de esputo o hisopado.
Detalle STAN
El paciente obtiene el diagnóstico de certeza de las especies genéticas del Complejo Burkholderia cepacia en un lapso de 4 días, resultado que solo puede obtenerse realizando tipificación por metodología molecular.
Prestación Detalle
Como estos pacientes suelen estar infectados/colonizados por más de una especie bacteriana, simultáneamente en nuestro laboratorio se hace el diagnóstico de dos especies que producen infecciones crónicas en esta comunidad de pacientes, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus meticilino resistente.
Metodología
A partir de 3 muestras de esputo o hisopado que se le solicitan al paciente, se realiza una Multiplex-PCR que permite diagnosticar la presencia i) de P. aeuginosa (Pae), ii) de las diferentes especies genéticas del Complejo Burkholderia cepacia (CBC) y iii) de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SAMR), directamente a partir de la muestra de esputo de pacientes con FQ. Se realiza paralelamente tanto el cultivo a partir de cada esputo con la correspondiente identificación bioquímica, como el desarrollo por biología molecular. Para la detección molecular se usan los siguientes cebadores: i) para Pae se amplifican los genes de oprL, y eta; ii) para el CBC se amplifica y realiza posterior secuenciación del gen recA; iii) para SAMR se amplifica el gen mecA. Se realiza la extracción de ADN a todas las muestras a partir de esputo y a partir de aislamiento en placa por el método de fenol-cloroformo con el agregado de DMSO (dimethyl sulfoxide) que aumentó la especificidad del apareamiento de los primers en la PCR y eliminó el apareamiento erróneo de los primers. La concentración óptima de ClMg fue de 2.5mM y la temperatura óptima de annealing fue de 56ºC.
Responsable Técnico
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